测试报告

网站首页 >> 测试报告 >>实验报告 >> 动物组织透射电镜实验报告最新版20210403
详细内容

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一、实验试剂:

试剂名称

厂家

货号

产地

磷酸氢二钠

国药集团化学试剂有限公司

10020318

中国

磷酸二氢钠

国药集团化学试剂有限公司

200407190

中国

无水乙醇

国药集团化学试剂有限公司

100092183

中国

环氧丙烷

国药集团化学试剂有限公司

80059118

中国

812树脂包埋剂

Spi-Chem


美国

戊二醛固定液

Spi-Chem


美国

锇酸

Ted Pella Inc


美国

 

二、实验仪器:

仪器名称

厂家

型号

产地

超薄切片机

Leica

Leica UC7

奥地利维也纳

钻石刀

Daitome

Ultra 45°

瑞士

透射电子显微镜

HITACHI

HT7700

日本

150 目方华膜铜网

中镜科仪

AZH150

中国

 

三、实验步骤

1、取材固定:新鲜组织确定取材部后将所需观测样品切成1mm3左右小块。于2.5%戊二醛中4℃固定2-4h;

2、后固定:组织块0.1M磷酸漂洗液漂洗3次,每次15min,后将样品置入1%锇酸4℃冰箱中固定2h;

3、脱水:样品依次入 30%-50%-70%-80%-95%-100%-100%酒精中梯度脱水,每次15min,100%环氧丙烷3次,每次5min;

4、渗透包埋:环氧丙烷+包埋液(2:1),室温2h,环氧丙烷+包埋液(1:2)室温3h,纯包埋液室温过夜,更换纯包埋液,室温3-4h。然后用牙签挑出样品,于包埋板上包埋;

5、聚合:包埋板放于 60℃烘箱48h,待树脂完全聚合后,取出包埋块备用;

6、半薄定位及超薄切片:粗修块后,树脂块于超薄切片机半薄切片定位,根据定位情况进行修块后,对所需位置进行超薄切片,切片厚度70nm,铜网捞片;

7、染色:3%醋酸铀饱和酒精溶液染色8min;70%酒精清洗3次,超纯水清洗3次;2.7%枸橼酸铅溶液染色 8min;超纯水清洗3次,滤纸稍吸干;

8、观察拍照:透射电子显微镜下观察拍照。




文章描述:

       样品置于2.5%戊二醛中固定2-4h,磷酸漂洗液漂洗3次,1%锇酸4℃固定2h;ddH2O漂洗3次后乙醇梯度脱水,环氧丙烷过渡,812树脂梯度渗透后包埋,60℃聚合,包埋块用Leica UC7型超薄切片机进行半薄定位及超薄切片,醋酸双氧铀和柠檬酸铅双染色切片,用透射电镜观察组织超微结构。

 

英文描述:

The samples was fixed in 2.5% glutaraldehyde (pH 7.4) for 2h .After washed three times with 0.1M phosphate buffer (pH 7.2) and fixed in 1% osmic acid at 4℃for 2h. Then the samples was gradient dehydrated in a graded series of ethanol. Subsequently, the samples was embedded in Epon-Araldite resin for penetration and placed in a model for polymerization.After the semi thin section was used for positioning, the ultrathin section was made and collected for microstructure analysis.Followed the counterstaining of 3% uranyl acetate and 2.7% lead citrate.Then observed with a HT7800  transmission electron microscope . 



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